| 问题 | 可能的原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 无染色/染色较弱 | 抗体浓度不合适 | 滴定抗体，确定最佳的浓度 |
| 抗体超过有效期或者保存不当 | 重新购买抗体 | |
| 无法检测/触及到目标抗原 | 明确目标蛋白的预期位置（表面、胞内、核内）。 | |
| 将细胞置于冰上，防止表面抗原内化；加入叠氮化钠有助于解决 这个问题 | ||
| 透化处理可能不充分。如果检测目的蛋白在细胞浆或细胞核内， 请确保使用了适当的固定和透化方案。根据检测指标的不同，也许需 要不同的固定和透化缓冲液。在细胞透化处理时，甲醛固定可与 皂苷、Triton X-100或90%甲醇（冰预冷）结合使用；70%乙醇 （预冷）有时可作为替代的固定方法，特别是在检测细胞周期 时。可能需要调整固定或透化试剂的浓度 | ||
| 蛋白表达过低 | 确保细胞表达了目的蛋白质 | |
| 调整活化方案，以提高蛋白表达 | ||
| 对于分泌性蛋白，确保使用了高尔基体转运抑制剂 | ||
| 低密度抗原搭配弱的荧光染料 | 调整配色方案，确保所有低水平表达的蛋白质都搭配明亮的荧光染料 | |
| 流式细胞仪的光学设置无法检测荧光染料 | 确保使用了适当的激光器和滤光片来激发和检测荧光染料 | |
| 仪器堵塞 | 调整到合适的细胞浓度或用滤器过滤细胞悬液后上机 | |
| PMT电压设置太高，检测不到信号 | 调整电压，让细胞群体在检测范围内 | |
| 非特异性信号 | 抗体过量 | 做好抗体滴定，充分洗涤细胞 |
| 未封闭Fc受体 | 检测Fc受体高表达的细胞群（如巨噬细胞，单核细胞，中性粒细胞等），加商品化的Fc受体封闭剂或同种属来源的血清 | |
| 较高的自发荧光 | 做未染色对照排除自发荧光 | |
| 对于自发荧光高的细胞，如中性粒细胞，用红光激发的荧光素，如APC | ||
| 细胞固定时间过长 | 选用合适的固定破膜剂，避免长时间固定，最晚于48h内上机检测 | |
| 死细胞过多 | 小心处理细胞，上机前滤器过滤。加死活染料，排除死细胞 | |
| 散射信号异常 | 仪器设置不正确 | 确保采用正确的设置 |
| 活化的细胞 | 细胞活化可能影响散射特征。设置电压，让活化和未活化细胞都检测范围内 | |
| 侧向散射高，前向散射低 | 可能表明细胞已被裂解 – 通过显微镜检查。如果细胞被裂解，则 需要确保所用溶液均是等渗的。避免涡旋振荡，特别是在透化处 理之后。如果细胞被活化，则活化方案可能过于剧烈 | |
| 检查样品的微生物污染 | ||
| 样品固定/通透不佳 | 优化固定和透化方案，以防止细胞裂解。避免涡旋振荡和高速离心 | |
| 样品保存过久 | 使用新鲜的样品。长时间保存会增加细胞碎片和死细胞的比例， 特别是未固定样品 | |
| 裂红不充分 | 使用新鲜的红细胞裂解液，增加洗涤次数。分离PBMC时候，注意白膜层存在红细胞污染 |
