| 问题 | 可能原因 | 解决办法 |
|---|---|---|
| 高背景信号 | 洗板不充分 | 将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保孔区域洗涤充分 |
| 确保已在洗涤前弃去了所有残留的抗体溶液 | ||
| 增加洗涤次数 | ||
| 链亲和素-HRP结合物过量 | 检查偶联物的稀释度，在推荐的稀释度下使用 | |
| 封闭不充分 | 检查封闭液 | |
| 延长封闭时间 | ||
| 孵育时间过长 | 缩短孵育时间 | |
| 样品或标准品中含干扰物质 | 设置适当对照 | |
| 缓冲液受污染 | 新鲜配置缓冲液 | |
| 无信号 | 试剂添加顺序错误或试剂配制不正确 | 重复实验 |
| 检查试剂配制方法 | ||
| 复核试验试剂添加流程 | ||
| HRP被叠氮化合物污染 | 使用新鲜配制的试剂 | |
| 抗体用量不足 | 检查是否使用了推荐的抗体量 | |
| 增加抗体用量（浓度） | ||
| 使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体 | 检查使用的试剂 | |
| 捕获抗体与板结合较差 | 使用ELISA板，而非组织培养板 | |
| 使用不含其它杂蛋白的PBS溶解抗体 | ||
| 缓冲液受污染 | 新鲜配置缓冲液 | |
| 整板呈规则蓝色 | 洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶 | 严格按照说明书洗涤流程操作 |
| 底物溶液预混太早不新鲜 | 底物溶液混合后须立即使用 | |
| 封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染 | 每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽 | |
| 缓冲液有金属或HRP污染 | 新鲜配置缓冲液 | |
| 标准曲线不佳 梯度不明显 (值低或曲线平直) | 链亲和素-HRP结合物量不足 | 检查倍性稀释是否正确 |
| 捕获抗体与板结合较差 | 使用酶标板，而非组织培养板 | |
| 使用不含其它杂蛋白的PBS溶解抗体 | ||
| 检测抗体量不足 | 检查稀释度是否正确 | |
| 孵育时间不足 | 延长底物溶液孵育时间 | |
| 实验操作流程有误 | 严格按照说明书操作流程 | |
| 标准曲线稀释计算错误 | 重新计算制作新的标准曲线 | |
| 板内重复性差 | 洗板不充分 | 将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保孔区域洗涤充分 |
| 确保已在洗涤前弃去了所有残留溶液 | ||
| 酶标板包被不均匀 | 检查封闭步骤是否正确 | |
| 使用酶标板，而非组织培养板 | ||
| 使用不含其它杂蛋白的PBS溶解抗体 | ||
| 重复使用封板胶纸 | 每步均需更换使用新的封板胶纸 | |
| 未使用封板胶纸 | 须使用封板胶纸 | |
| 缓冲液受污染 | 新鲜配置缓冲液 |
